全世界约2.57亿人正遭受着乙型肝炎病*（HepatitisBvirus,HBV）感染的困扰，其中大约1/3的感染者在中国。据年统计数据显示，我国在新发感染人数小幅度下降的情况下，乙型肝炎患者依旧在万以上。HBV感染的防控仍是我国面临的一个重大公共卫生问题。HBV属于嗜肝DNA病*，主要感染人的肝细胞，其慢性感染可导致慢性乙型病*性肝炎（简称慢性乙肝），并可显著提高肝纤维化、肝硬化甚至肝癌的发病率（图1）。然而，目前并没有药物可以有效清除感染病*，只能通过提前注射疫苗来防止感染。
图1三步曲：肝炎、肝硬化、肝癌
HBV慢性感染难以治愈的原因主要有两方面：
1、HBV感染产生的共价闭合环状DNA（covalentlyclosedcircularDNA,cccDNA）难以清除，持续存在。
2、HBVDNA可部分整合到人的基因组，稳定存在。
乙肝病*基因组整合的研究进展
HBV线性双链DNA（double-strandedlinearDNA,dslDNA）是HBVDNA整合的主要分子。dslDNA主要由HBV正义链(+)-DNA的异常原位起始延伸产生（图2）。
图2HBVdslDNA的合成过程
dslDNA在底物整合进细胞的基因组之前，可能需要经过以下加工过程（图3）：
1.去除(-)-DNA5’端共价结合的HBV聚合酶蛋白（Pol）
2.去除(+)-DNA5’端的Cap结构
3.补齐(+)-DNA
细胞基因组双链断裂的位置被认为是HBVDNA整合插入的主要位点，非同源末端连接（nonhomologousendjoining,NHEJ）和微同源介导的末端连接（microhomology-mediatedendjoining,MMEJ）被认为参与了HBVDNA整合插入的过程（图3）。
图3HBVdslDNA整合机制示意图
HBVDNA整合的相关研究模型
HBVDNA整合的现象在年首次被报道，当时采用的检测方法为Southernblot杂交。在之后40年的研究进程中，检测方法不断发展，主要有以下几种：
1.Southernblot杂交
2.原位杂交
（InSituHybridization）
3.克隆构建及测序
（CloningandNucleotideSequencing）
4.聚合酶链式反应
（PolymeraseChainReaction,PCR)
5.高通量测序技术
（High-ThroughputSequencingTechnology）
HBVDNA整合的相关研究模型
目前我们对HBVDNA整合的认知主要来源于两方面研究：HBV感染患者肝组织样品；其他嗜肝DNA病*的非灵长类动物模型，如土拨鼠肝炎病*感染土拨鼠的动物模型，鸭HBV感染鸭的动物模型。但随着HBV受体人牛磺胆酸酸钠共转移多肽（humansodiumtaurocholatecotransportingpolypeptide,hNTCP）被发现，一系列可支持HBV感染的细胞及动物模型被建立，这些新型的模型势必对HBVDNA整合的研究带来极大的便利和促进。
目前支持HBV感染的模型主要有以下几种：
细胞模型：
1.人原代肝细胞（PrimaryHumanHepatocytes,PHH）
2.人肝干细胞系HepaRG及其hNTCP稳转细胞系（HepaRG-hNTCP）
3.hNTCP稳转人肝癌细胞系，如HepG2-hNTCP和Huh7-hNTCP细胞系
4.干细胞分化的肝细胞
动物模型：
1.黑猩猩
2.表达hNTCP的猕猴
3.树鼩
4.人肝嵌合小鼠
HBVDNA整合在肝细胞癌中的作用
慢性HBV感染被认为是肝细胞癌（HepatocellularCarcinoma,HCC）发生的一个重要风险因素。有研究指出乙肝患者发生肝癌的几率比未感染者高10-倍，而HBVDNA整合在此过程中发挥着重要作用。与癌旁组织相比，HBVDNA的整合频率在肝癌细胞中更高（86.4%vs30.7%）。HBVDNA整合在HCC的发生发展中所起作用的分子机制主要有以下几个方面：
1.插入突变，导致HCC相关基因的异常表达
2.破坏染色体的稳定性
3.HBVDNA部分整合导致截短或与宿主蛋白融合的病*蛋白产生，导致细胞生理特性的改变及相关的病变，如全长或截短的HBsAg及HBx。
目前HBV治疗的目标是获得“功能性治愈”，即停止用药后，血清中持续检测不到HBVDNA；HBsAg的消失，伴随或不伴随HBsAg抗体的产生；正常的肝功能及组织形态。整合到细胞基因组中的HBVDNA可作为HBsAg产生的稳定模板，从而阻碍“功能性治愈”的实现。针对整合HBVDNA所转录出的转录本设计的siRNA相关药物，可能会对降低患者体内的HBsAg水平起到积极的作用。
总结与展望
在乙肝病*被发现的55年里，科研人员对HBVDNA整合的研究取得了一定进展，但仍有一些问题亟待解决，如HBVDNA整合的具体分子机制，在HCC发生发展中的具体作用及机制等。新型HBV感染模型的建立将会对HBVDNA整合的研究带来极大的便利和促进。HBVDNA整合应作为一种临床检测指标，用来综合全面地评估HBV患者的疾病发生发展风险。为降低HBVDNA整合对HBV患者疾病的影响，需要重视针对HBVDNA整合的治疗手段及药物研发。同时降低患者肝细胞中cccDNA含量及削弱整合HBVDNA所带来的影响，将会更加有利于HBV“功能性治愈”的实现。
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